Cell Synchronization Kit - 60 reakcí - Biological Industries (Sartorius)

Sada pro synchronizaci buněk pro cytogenetickou analýzu s vysokým rozlišením, která umožňuje podrobnější analýzu karyotypu.

Metoda karyotypizace krevních buněk byla vyvinuta s cílem poskytnout informace o chromozomálních abnormalitách. Lymfocyty normálně neprocházejí následným dělením buněk. V přítomnosti mitogenu jsou lymfocyty stimulovány ke vstupu do mitózy replikací DNA. Po 48-72 hodinách se ke kultuře přidá mitotický inhibitor, aby se zastavila mitóza ve stádiu metafáze. Po ošetření hypotonickým roztokem, fixací a barvením lze chromozomy mikroskopicky pozorovat a hodnotit na abnormality.

Analýza s vysokým rozlišením je speciální manipulace s rutinním postupem karyotypizace krve navržená tak, aby poskytla velké množství mitotických obrazců v pozdní profázi nebo prometafázi. V této fázi mitózy jsou chromozomy delší a méně kondenzované. Po G-páskování budou chromozomy vykazovat vyšší úroveň rozlišení pásma, která nebyla pozorována při rutinní analýze. Vysoké rozlišení umožňuje podrobnější analýzu karyotypu.

Kultury lze synchronizovat přidáním metotrexátu (MTX), inhibitoru biosyntézy thymidinu, který blokuje buňky v S-fázi (syntéza DNA) buněčného cyklu. Po 16-18 hodinách je většina dělících se buněk v kultuře v S-fázi. Pokud se ke kultuře přidá thymidin, blok MTX se uvolní a buňky synchronně procházejí k mitóze, v tomto okamžiku může být přidán kolcemid. Velmi krátká léčba kolcemidem ve spojení s touto technikou může být použita k produkci prodloužených prometafázových chromozomů, když je zde podezření na malé výmazy nebo přeuspořádání.

Materiály

Methotrexát (Amethopterin), 10-5M v HBSS: 4 lahvičky obsahující 1,5 ml
Thymidin, 10-3M v destilované vodě: 4 lahvičky obsahující 1,5 ml